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高红岩等将流态冰预冷与冰温贮藏相结合,研究其对新鲜鳕鱼片质量的影响,发现预冷可延长样品从中性期到腐败期的过程,延长货架期达17d。
10号传感器W3S对烷烃灵敏2.2.3 响应面分析响应面图是回归方程的图形表述,从响应面图中可快速找到最佳参数。
如表5所示,发酵后溶液中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)等几种呈味氨基酸的含量均有明显上升,其中Gly和Glu的含量相对较高,使发酵液呈现柔和的甜味和较强的鲜味。在修正条件下进行3次平行验证实验,感官评分9.310.32。当发酵时间固定不变时(图5C),随着盐度的增加,发酵液感官评分也是先上升后下降。其中,模型的极显著因子项(P<0.01)有B、AC、B2和C2,显著的因子项(P<0.05)为C,可知感官评分受发酵时间的影响最大。当盐度固定不变时(图5B),酵母添加量小于4.5时,感官评分上升,添加量超过4.5时,感官评分随即下降。
根据氨基酸的味觉强度可大致分为鲜味、甜味、苦味和无味四大类。与理论预测值相符,说明该优化结果可靠,可进一步利用开发为新型调味品。抑制类型由Lineweaver-Burk双倒数作图法来判断。
2.4 肉桂醛缩氨基脲对XOD抑制常数以黄嘌呤为底物,研究了肉桂醛缩氨基脲对黄嘌呤氧化酶活性的抑制常数。纵坐标是Y轴截距,横坐标是肉桂醛缩氨基脲浓度,作图,可以计算出肉桂醛缩氨基脲的抑制常数KIS,即抑制剂对酶底物复合物的亲和能力(见图4(c))。肉桂醛缩氨基脲对黄嘌呤氧化酶活性抑制效果显著,IC50为55.48mol/L,是混合型可逆抑制,抑制常数KI为27.25mo儿,KIS为50.30mol/L。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系。
与模型组相比,肉桂醛缩氨基脲能显著降低小鼠血尿酸质量浓度、血清XOD活性和肝脏XOD活性,差异显著(P<0.05,n=10)。与模型组小鼠相比,肉桂醛缩氨基脲组小鼠血清XOD活性降低,差异显著(P<0.05,n=10)。
改变加入黄嘌呤的浓度,加入0.1mL酶活为0.2U/mL的黄嘌呤氧化酶,加入肉桂醛缩氨基脲使体系内终浓度分别为O、30、40、60mol/L,测定不同浓度肉桂醛缩氨基脲对酶活性的影响。纵坐标是反应速率的倒数,横坐标是底物浓度的倒数,作图,试验结果见图4(a),显示一组直线相交于第二象限,推测出肉桂醛缩氨基脲不仅能够与酶底物复合物结合,还能与游离酶结合,说明肉桂醛缩氨基脲抑制黄嘌呤氧化酶活性的类型为混合型抑制作用ESI-MS,m/zMr=219.32,[M+H]+(C11H13N3S)。在第6天灌胃1h后,小鼠进行断头采血,血样分别置于1.5mL离心管中,在4℃冰箱中凝固2h,在4℃下3000r/min离心5min。
UV(Me0H)max305,358nm。1.5 统计学处理用SPSSl9.0软件进行统计分析,计量资料以平均值标准偏差表示,组间比较用t检验。由图3可知,以酶促反应的速度对酶质量浓度作图,为一组通过原点的直线,由此判断肉桂醛缩氨基脲对XOD抑制机理为可逆抑制。别嘌呤醇组每天按10mg/kg剂量灌胃1次,持续6天。
2.2 化合物对XOD抑制活性肉桂醛及其席夫碱衍生物对XOD的抑制率见图2。1H-NMR(400MHz,DMS0-d6):11.350(s,1H,NH),8.123(s,1H,CH=N),7.859(d,1H,Ph-H),7.539(d,2H,NH2),7.541(d,1H,Ph-CH=),7.341(t,3H,Ph-H),6.998(d,1H,Ph-H),6.838(q,1H,=CH-)。
肉桂醛缩氨基脲抑制XOD活性比肉桂醛缩氨基硫脲类化合物强,可能与氨基脲上的羰基能与XOD酶上的氨基酸残基形成氢键,而硫脲不能形成氢键有关。每份血清进行血尿酸和血清XOD活性测定。
ESI-MS,m/z=189.23,[M+H]+(C10H11N30)。其中各折线依次代表抑制剂别嘌呤醇、肉桂醛缩氨基脲、肉桂醛、肉桂醛缩苯基氨基硫脲、肉桂醛缩甲基氨基硫脲、肉桂醛缩氨基硫脲。相关链接:肉桂醛,黄嘌呤,尿酸,硫脲声明:本文所用图片、文字来源《食品与生物技术学报》,版权归原作者所有。肉桂醛组、肉桂醛缩氨基脲组小鼠每天按0.1g/kg剂量灌胃6天。采血后,取出肝脏,匀浆处理,离心取上清,测XOD活性。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系。
雄性昆明种小鼠适应性饲养一周后,随机分成正常对照组、高尿酸模型组、别嘌呤醇组、肉桂醛缩氨基脲组、肉桂醛组共5组,每组10只。ESI-MS,m/zMr=205.3,[M+H]+(C10H11N3S)。
化合物c(肉桂醛缩甲基氨基硫脲,cinnamaldehvdeshrinkagemethvlthiosemicarbazide,CSMT):黄色粉末(CH30H)。10.174(s,1H,NH)7.653(s,1H,CH=N),7.49(d,2H,Ph-H),7.345(t,2H,Ph-H),7.265(t,1H,Ph-H),6.852(d,2H,CH=CH),6.26(s,2H,NH2)。
化合物b(肉桂醛缩氨基硫脲,cinnamaldehvdethiosemicarbazide,CT):浅黄色菊花晶(CH30H)。这可能与疏水性有关,苯基的疏水性最大,其次是甲基,然后是无取代基。
由于肉桂醛缩氨基脲抑制XOD活性最强,以下测定抑制机理和抑制类型就只研究肉桂醛缩氨基脲。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):11.401(s,1H,NH),8.24(s,1H,CH=N),7.87(d,1H,CH=),7.521(d,2H,Ph-H),7.36(t,2H,Ph-H),7.294(t,1H,Ph-H),6.988(d,1H,CH=),6.833(m,1H,NH),2.942(d,3H,CH3)。UV(MeOH)max305,350nm。1H-NMR(400MHz,DMS0-d6):11.79(s,1H,NH),9.89(s,1H,NH-Ph),7.98(s,1H,CH=N),6.96(dd,1H,=CH-),7.05(d,1H,Ph-CH=),7.15(d,1H,Ph-H),7.35(m,5H,Ph-H),7.58(dd,4H,Ph-H)。
2 结果与分析2.1 化合物结构表征化合物a(肉桂醛缩氨基脲,cinnamicaldehydesemicarbazone,CAS):无色针晶(CH30H)。化合物d(肉桂醛缩4-苯基氨基硫脲,cinnamaldehvdeshrinkagephenvlthiosemicarbazide,CSPT):无色针晶(CH30H)。
UV(MeOH)max308,306nm。2.3 肉桂醛缩氨基脲对XOD抑制类型在测活体系中,固定底物黄嘌呤浓度,改变XOD酶的质量浓度,测定不同浓度的抑制剂肉桂醛缩氨基脲(0、50、75、100mol/L)对XOD酶活性的影响。
ESI-MS,m/zMr=281.39,[M+H]+(C16H15N3S)。其IR、1H-NMR、ESI-MS数据与文献报道一致。
别嘌呤醇、肉桂醛缩氨基脲、肉桂醛、肉桂醛缩苯基氨基硫脲、肉桂醛缩甲基氨基硫脲、肉桂醛缩氨基硫脲抑制XOD的IC50值分别是(7.050.14)、(55.480.54)、(90.930.72)、(122.480.65)、(201.290.88)、(241.571.32)mol/L(n=3)。由图2可知,同一种抑制剂,浓度越大,酶活性越低。连续2天,造成小鼠高尿酸血症模型。从给药第5天开始,除正常对照组外,其他各组每天灌胃前1h均要腹腔注射0.3g/kg氧嗪酸钾和0.25g/kg尿酸,每天1次,连续2天进行造模。
正常对照组和高尿酸模型组,每天按20mL/kg剂量灌胃生理盐水,持续6天。即疏水性基团越大,抑制活性越好。
1.4.4 肉桂醛缩氨基脲对小鼠血尿酸质量浓度、血清XOD活性和肝脏XOD活性的影响参照文献方法,用氧嗪酸钾和尿酸腹腔注射小鼠。UV(MeOH)max352,348nm。
抑制XOD活性,苯基取代硫脲>甲基取代硫脲>硫脲。各化合物活性顺序是别嘌呤醇>肉桂醛缩氨基脲>肉桂醛>肉桂醛缩苯基氨基硫脲>肉桂醛缩甲基氨基硫脲>肉桂醛缩氨基硫脲。
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